中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会发布

                                      前    言

    本标准是对《》的修订。

    本标准与相比主要变化如下：

    ——修订了标准名称

    ——修订了生物降解度计算公式

    ——修订了附录B.1非离子表面活性剂的定量方法

    ——增加了阳离子和两性离子表面活性剂的定量方法

    ——增加了烷基多苷类表面活性剂的定量方法

    ——修订了附录B.2的泡沫体积法

    ——增加了DT-90试验

    ——修正了山梨醇脂肪酸酯的归属

    本标准的附录A、附录B、附录C、附录D和附录E均为规范性附录。

    本标准由中国轻工业联合会提出。

    本标准由全国表面活性剂洗涤用品标准化中心归口。

    本标准起草单位：中国日用化学工业研究院

    本标准主要起草人：赵郁梅、秦勇

    本标准于1995年12月8日首次发布，本次为第一次修订。

    本标准自实施之日起，代替《》。

    表面活性剂生物降解度试验方法

    1. 范围

    本标准规定了表面活性剂初级生物降解度的试验方法。

    本标准适用于测定具有磺酸基和硫酸基的阴离子表面活性剂；聚氧乙烯基团单链加合数为3~40和二、三链总加合数6~60的表面活性剂；烷基糖苷类表面活性剂；阳离子与两性离子表面活性剂和具较丰富泡沫的表面活性剂的生物降解度。本标准亦适用于洗涤剂中上述表面活性剂生物降解度的测定。

    2. 规范性引用文件

    下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

    GB/T 5173  表面活性剂  阴离子活性物的测定  直接两相滴定法（eqv ISO 2271：1989）
    GB/T 5327  表面活性剂名称术语（idt ISO 862：1984）
    GB/T 5328  表面活性剂简化分类（idt ISO 2123：1972）
    GB/T 5560  表面活性剂  纺织助剂  聚乙二醇型非离子表面活性剂  活性物及聚乙二醇含量的测定方法（idt ISO 2268：1972）
    GB/T 13173.1  洗涤剂样品分样方法(eqv ISO 607:1980)
    GB/T 13173.2  洗涤剂中总活性物含量的测定
    GB/T 13173.3  洗涤剂中非离子表面活性剂含量的测定(neq JIS K3362:1978(84)
    GB/T19464  烷基糖苷
    QB/T2344  两性表面活性剂脂肪胺基二甲基甜菜碱

    3.术语与定义

    下列术语和定义适用于本标准：

    3.1生物降解  biodegradability

    有机物在生命有机体的复杂活动下发生的分子降解。

    3.2 初级生物降解  primary biodegradability

    原始母体分子特性在一定程度上消失，即某一给定的分析方法不显示阴性结果。

    3.3消失时间DT-90  disappear time

    表面活性剂生物降解度达到初始浓度的90%时所消耗的时间。

    4 方法概要

    以表面活性剂试样经培养驯化的活性污泥做降解生物源，加入试验份中进行振荡培养，测定培养周期中表面活性剂的减少量得到试样的DT-90和规定时间的生物降解度。

    5 仪器和设备

    普通实验室仪器

    5.1 振荡培养瓶

    容量1L，用棉塞塞紧，于烘箱中在170℃灭菌1~2h。

    5.2 振荡培养机

    振幅24~51mm，振荡频率200~250次/min的回转式振荡机，或振幅50~100mm振荡频率100~130次/min的往复式振荡机。

    5.3 压力蒸汽灭菌器

    额定温度126 C，额定压力0.14Mpa。

    6 试剂和材料

    除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

    6.1 氯化铵（GB/T658）

    6.2 磷酸氢二钾（HG3155）

    6.3 硫酸镁（GB/T671）

    6.4 氯化钾（GB/T646）

    6.5 硫酸亚铁（GB/T664）

    6.6 酵母浸膏 (生化试剂)

    6.7 直链十二烷基苯磺酸钠：含量95%以上，生物降解度大于99%。

    6.8 直链十二醇聚氧乙烯醚（7）：含量98%以上，生物降解度大于99%。

    6.9  微生物源

    活性污泥取自处理民用废水的污水处理厂，活性污泥悬浊物的浓度应调整为10000～20000g/L，采样后在5h内使用。

    6.10 甲醛（GB/T685）

    7.  测试程序

    7.1 试样的制备

    7.1.1 试样若以洗涤剂或其它混合物形式存在时应按GB/T5173、GB/T13173.1、GB/T13173.2、GB/T13173.3制备表面活性剂试样。

    7.1.2 试验份参照物（6.7、6.8）制成中性1g/L溶液，备用。

    7.1.3 分离后的表面活性剂试样制成中性1g/L溶液，备用。

    7.2 基础营养基溶液的制备

    用于试验的培养基溶液组成如下：

                      水                      1L
                      氯化铵                  3.0g
                      磷酸氢二钾              1.0g
                      硫酸镁                  0.25g
                      氯化钾                  0.25g
                      硫酸亚铁                0.002g
                      酵母浸膏                0.3g

    酵母浸膏在使用前加入。已加入酵母浸膏的营养基溶液存放超过8h，则要进行高压灭菌处理（于0.11 MPa～0.13MPa，122℃~125℃，灭菌20min），试验中所采用的水应不含抑菌物。

    7.3  试验溶液的制备

    7.3.1 在含500mL基础营养基溶液（7.2）的培养瓶中，加入试验份（7.1），浓度约30mg/L。

    7.3.2 为了验证试验条件，在另一份500ml基础营养基溶液（7.2）中加入直链十二烷基苯磺酸钠溶液或十二醇聚氧乙烯醚溶液（7.1.2）作为对照试验培养瓶，使浓度约30mg/L。

    7.3.3 空白试验  基础营养基溶液（7.2）500ml,不加表面活性剂。

    7.4  活性污泥的接种

    在7.3的各培养瓶中，加入500mL基础营养基溶液（7.2），加入5mL活性污泥悬浊液（6.9）。

    7.5  培养

    将已接种活性污泥加入试验份（7.1.3）于各培养瓶（7.4），安装在振荡培养机（5.1）上，于25℃±3℃进行振荡，开始培养72h。

    7.6  驯化

    量取基础营养基溶液（7.2）500ml于驯化瓶中，加入培养液（7.5）5mL，加入试验份（7.1.3）后，将驯化瓶安装在振荡培养机（5.1）上，于25℃±3℃进行振荡，开始驯化72h。

    7.7  生物降解度试验

    量取基础营养基溶液（7.2）500ml于降解瓶中，加入驯化液（7.6）5mL，加入试验份（7.1.3）后，将降解瓶安装在振荡培养机（5.1）上，于25℃±3℃进行振荡，振荡30min后取样。按附录中相应的定量方法测定初始降解液的表面活性剂浓度。以后根据要求在需要时间内取样测定，逐步得到DT-90试验结果。或在满7天及满8天时，分别从各降解液瓶中取样测定降解液中的表面活性剂浓度。测定方法据试样特性分别按附录A、附录B、附录C、附录D、附录E进行。

    如果不及时测定，则按每100mL阴离子表面活性剂试样溶液中加入1mL甲醛溶液（6.10）以便保存。其它表面活性剂试验溶液不可加甲醛保存，否则会影响结果的准确性。

    8  结果计算

    表面活性剂的生物降解度由降解初始浓度（mg/L）或泡沫体积（mL）与降解后浓度（mg/L）或泡沫体积（mL）之差对降解初始浓度或初始体积的比值，求出相应时间的表面活性剂降解百分率，按下式计算出生物降解度D，所得结果修约至小数点一位。   

    9.  试验条件

    如果参照物直链十二烷基苯磺酸钠的生物降解度低于97.5%或十二醇聚氧乙烯醚（7）的生物降解度低于95.0%，以及第七天和第八天的降解度之差大于2.0%时，则试验无效。

    10.结果报告

    根据要求，DT-90的结果以降解度/时间报出，最终降解结果以第七天的降解度报出。

    本标准附录中涉及的表面活性剂定量方法可据工作曲线直接使用，也可据一元回归方程y=a+bx计算使用。

    附录A（规范性附录）阴离子表面活性剂的测定——亚甲基蓝法（略）

    附录B（规范性附录）乙氧基型表面活性剂的测定——硫氰酸钴法（略）

    附录C（规范性附录）阳离子和两性离子表面活性剂的测定——金橙-2法（略）

    附录D（规范性附录）烷基糖苷类表面活性剂的测定——蒽酮法（略）

    附录E（规范性附录）泡沫体积法（略）

    附录F（规范性附录）泡沫体积法（略）